Лабораторная диагностика дифтерии
- Забор и посев материала
- Бактериоскопическое и бактериологическое исследования
- Реакции ферментации углеводов
1. Лабораторная диагностика дифтерии производится с целью:
- постановки диагноза острого заболевания;
- установления бациллоносительства;
- определения вирулентности (токсичности) дифтерийных палочек.
Материал для исследования (чаще всего мазок из носа) берут стерильным ватным тампоном. Не следует брать материал после приема пищи или полоскания дезинфицирующими растворами.
Посев необходимо произвести сразу после взятия материала (не позже 5—6 ч) в пробирку со свернутой кровяной сывороткой и сывороткой Леффлера, а затем поставить в термостат при 37 °С.
2. Бактериоскопическое и бактериологическое исследования
Через 18—20 ч роста в положительных случаях на поверхности среды видны многочисленные бисерные, близко расположенные друг к другу колонии. Предварительный диагноз можно дать уже через 8 ч. Материал с тампона можно засеять на чашку с кровяным теллуровым агаром или на среду Клауберга II. Колонии, выросшие на чашках через 24—48 ч, изучают микроскопически и отсевают на чашки Петри со специальной средой для определения токсичности. На следующие сутки учитывают результаты посева культур на средах для определения токсичности и биохимических свойств и микроскопируют чистую культуру со свернутой сыворотки. Если выделена разлагающая углеводы нетоксичная культура, необходимо поставить дополнительные пробы на цистиназу и реакцию агглютинации с политиповой дифтерийной сывороткой. Реакцию агглютинации ставят на стекле с помощью монотиповых дифтерийных сывороток.
3.Для идентификации чистой культуры дифтерийной палочки и дифференцировки ее от псевдодифтерийной палочки Гормана
исследуют биохимические свойства выделенной чистой культуры. Исследование проводится на средах Yuccaили на водно-сывороточной среде (20%-ной лошадиной сыворотке).
Дифтерийная палочка расщепляет только глюкозу — имеет только столбик, дифтероиды ферментируют глюкозу и сахарозу — синий цвет будет у всей среды, ложнодифтерийная палочка не расщепляет Сахаров, но разлагает мочевину — вся среда приобретает оранжевый цвет.
На основании реакций ферментации углеводов можно также установить 2 основных биологических типа дифтерийной палочки: грависи митис.
Формулировка окончательного ответа при положительном анализе: "Выделены токсичные (нетоксичные) дифтерийные палочки", в случае изучения культурально-биохимических признаков указывается принадлежность к типу гравис или митис, а при серотипировании культуры указывается серологический тип.